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第一章 绪论1

第一节 感染性疾病和肿瘤的分子诊断2

第二节 单基因病和多基因病的分子诊断3

第三节 基因诊断的常用技术3

第四节 分子诊断面临的问题5

第二章 现代分子生物学的重要研究方法和技术7

第一节 重组DNA技术7

第二节 同源重组的机制8

一、断裂重接和异源双链8

二、枝链迁移9

三、碱基对的错配及消除9

四、DNA分子的配对10

第三节 基因沉默与基因敲除10

一、基因沉默11

二、基因敲除13

一、传统研究基因表达差异的方法14

第四节 基因表达差异分析14

二、差异展示技术15

三、代表差异分析技术15

四、基因表达系列分析技术16

五、生物芯片技术16

第三章 目的基因的获得18

第一节 从原核生物获取目的基因18

一、大肠杆菌的基因18

二、用转导噬菌体分离宿主菌的基因19

第二节 从真核生物获取目的基因的常用方法19

一、化学合成法20

二、聚合酶链反应20

三、基因组DNA文库21

四、cDNA文库22

第三节 目的基因序列测定25

一、目的基因序列测定的意义25

二、目的基因测序方法26

三、长链DNA测序的策略27

第四章 重组载体的构建与筛选29

第一节 克隆载体的基本结构和功能29

一、基本结构29

二、功能31

三、克隆载体的种类32

四、表达载体的种类38

第二节 重组载体的构建39

一、凝胶电泳39

二、目的基因和载体的限制性内切酶酶切的设计和应用40

三、目的基因和线状载体DNA片段的分离和回收41

四、目的基因与载体的连接策略41

五、重组载体导入相应细胞42

六、重组DNA细胞的筛选43

第五章 外源基因在宿主细胞中的表达与调控46

一、原核生物的顺式作用元件和转录调控蛋白47

第一节 原核基因表达的调控47

二、翻译的可调控性及调控方式49

第二节 真核生物基因表达的调控51

一、真核生物基因表达调控的分子机制51

二、DNA和染色质结构对转录的调控55

三、转录起始的调控56

四、转录后的调控56

五、翻译的可调控性及调控方式58

六、翻译后加工的调控意义58

第三节 外源基因的表达59

一、外源基因的表达系统59

二、外源基因高效表达的措施61

第六章 核酸分子杂交技术63

第一节 核酸分子杂交的基本原理63

一、DNA变性与复性64

三、影响杂交的因素66

二、杂交体系的建立66

第二节 核酸探针67

一、探针的种类68

二、标记物69

三、标记方法69

四、探针的纯化71

第三节 核酸分子杂交的基本方法71

一、Southern印迹杂交72

二、Northern印迹杂交75

三、Western印迹杂交75

四、斑点及狭缝印迹杂交76

五、原位杂交76

六、液相杂交77

第七章 聚合酶链反应79

第一节 PCR的原理79

一、PCR原理简介79

二、PCR的七种基本成分80

三、PCR引物设计82

四、模板的制备83

第二节 PCR基本反应83

一、以DNA为模板的反应83

二、以RNA为模板的反应83

三、PCR产物的积累规律83

四、PCR反应的自动化84

五、PCR反应条件的控制84

第三节 PCR的污染及对策86

一、实验室空间87

二、操作和进行PCR的规则87

三、溶液和设备的去污染87

四、PCR实验中应注意的事项88

第四节 PCR技术的主要类型88

三、共享引物PCR89

二、筑巢PCR89

一、反转录PCR89

四、多重PCR90

五、不对称PCR90

六、锚定PCR90

七、反向PCR90

八、彩色PCR90

九、原位PCR91

十、差异显示PCR91

十一、重组PCR92

第五节 定量PCR92

一、内参照定量PCR93

二、竞争PCR作mRNA定量93

三、酶标记定量PCR94

四、荧光素标记的定量检测95

五、定量PCR技术的应用98

二、基因的体外突变99

第六节 PCR技术的主要用途99

一、目的基因的克隆99

三、DNA和RNA的微量分析100

四、DNA序列测定100

五、基因突变分析100

第七节 连接酶链反应100

一、LCR的基本原理100

二、LCR产物的检测101

三、影响LCR的重要因素101

四、LCR技术的扩展101

第八节 RNA的体外扩增102

一、基本原理102

二、产物的检测103

三、RNA-PCR技术的特点和应用103

一、HLA复合体结构特征104

第一节 人类主要组织相容性复合体104

第八章 HLA的检测与应用104

二、HLA复合体遗传特征106

第二节 人类主要组织相容性抗原107

一、HLA抗原的分子结构107

二、HLA抗原的表达及其调控109

第三节 HLA分型技术111

一、血清学分型111

二、细胞学分型112

三、基因分型112

第四节 HLA与医学的关系116

一、HLA与疾病相关性116

二、HLA抗原表达异常与疾病的关系117

三、HLA与器官移植118

四、HLA与输血119

五、HLA与法医119

一、癌基因120

第九章 肿瘤疾病的基因诊断120

第一节 肿瘤的发生与基因120

二、抑癌基因122

三、肿瘤的发生与多重基因变化124

第二节 基因诊断在肿瘤研究中的意义和应用125

一、肿瘤易感基因的检测125

二、肿瘤的早期诊断和筛检125

三、肿瘤的分类126

四、肿瘤的预后判断126

五、肿瘤的预后监测126

六、肿瘤的治疗126

第三节 肿瘤的基因诊断方法127

一、肿瘤基因诊断的策略127

二、肿瘤基因诊断的原理和方法127

三、肿瘤基因诊断的具体方法128

一、ras癌基因的检测133

第四节 临床常见肿瘤疾病相关基因的检测133

二、抑癌基因p53的检测134

三、其他基因的检测134

第十章 感染性疾病的基因诊断136

第一节 感染性疾病基因诊断的策略136

一、一般性检出策略和方法136

二、完整检出策略和方法137

第二节 病毒性肝炎的基因诊断137

一、肝炎病毒及其基因138

二、病毒性肝炎的基因诊断142

三、细菌性疾病的基因诊断146

四、寄生虫疾病的基因诊断150

第十一章 呼吸系统疾病的基因检测153

第一节 肺癌与基因异常153

一、概述153

二、肺癌的基因异常154

一、概述156

第二节 慢性阻塞性肺疾病与基因异常156

二、慢性阻塞性肺疾病与基因异常157

第三节 支气管哮喘与基因异常158

一、概述158

二、支气管哮喘与基因异常159

第四节 特发性肺纤维化与基因异常160

一、概述160

二、肺纤维化症与基因异常161

第五节 囊性纤维化与基因异常163

一、概述163

二、囊性纤维化与基因异常163

第六节 肺部感染性疾病的基因诊断164

一、肺结核病164

二、支原体肺炎165

三、人巨细胞病毒肺炎165

一、囊性纤维化和a1AT缺乏症166

第七节 呼吸系统疾病与基因治疗166

二、恶性肿瘤167

三、其他168

四、载体的开发状况168

第八节 呼吸系统疾病与基因芯片169

一、基因芯片简介169

二、基因芯片在部分呼吸系统疾病中的研究应用现状169

第十二章 消化系统疾病的基因检测172

第一节 消化道肿瘤与基因异常172

一、概述172

二、消化肿瘤的基因诊断与基因治疗174

第二节 消化道感染性疾病与基因异常176

一、病毒性肝炎177

二、幽门螺杆菌感染179

第三节 消化系统遗传疾病与基因184

一、基因克隆185

第一节 心血管疾病基因检测的常用分子生物学技术185

第十三章 心血管疾病的基因检测185

二、多聚酶链反应186

三、基因转移技术187

四、基因打靶技术188

五、反义核酸技术189

六、候选基因关联研究190

七、定位克隆190

八、动物模型191

九、单倍型191

十、节俭基因型192

十一、MS分析方法192

第二节 心血管疾病及其基因193

第三节 心血管疾病基因单核苷酸多态性的检测197

第四节 基因表达芯片对心血管疾病的检测200

第五节 载脂蛋白基因异常表达与高脂血症和动脉粥样硬化202

一、载脂蛋白（a）表型208

第六节 载脂蛋白表型及基因型的检测208

二、载脂蛋白E表型210

三、载脂蛋白B基因多态性的检测211

四、载脂蛋白CⅢ基因型检测212

第十四章 产前诊断的基因检测214

第一节 含有胎儿遗传信息的细胞成分及其种类214

第二节 产前诊断的技术215

第三节 基因检测技术217

第四节 产前诊断的内容219

一、染色体病219

二、单基因遗传病224

三、宫内感染疾病225

第十五章 重组DNA技术及其应用230

第一节 重组DNA技术的应用231

一、重组DNA技术在医学上的应用231

二、重组DNA技术在农业上的应用233

第二节 基因工程抗体236

三、基因工程在环境保护中的应用236

一、抗体工程技术237

二、基因工程抗体的应用238

第十六章 蛋白质组学及其在医学上的应用240

第一节 蛋白质组学研究的相关技术240

第二节 蛋白质组学在医学中的应用243

一、在肿瘤中的应用243

二、在中枢神经系统疾病（CNS）中的应用246

三、在心血管疾病中的应用247

四、在感染性疾病中的应用248

五、在精神疾病中的应用249

六、在抗体工程中的应用249

七、在药物开发中的应用250

八、其他250

参考文献253